Folin－酚試劑法（又名Lowry）法
發(fā)布日期：2011-12-23 瀏覽次數：5841
Folin－酚試劑法（又名Lowry）法
Folin-酚試劑法zui早由Lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優(yōu)點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要控制操作時間，標準曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質多。 Folin-酚試劑法同時也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。此法可測定范圍是20~250mg，檢測的zui低蛋白量可達5mg。
Folin-酚法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。 蛋白質中含有酚基的酪氨酸，在堿性溶液中其肽鍵與Cu2+螯合，形成蛋白質一銅復合物，此復合物使酚試劑的磷鉬酸還原，產生藍色化合物，在一定條件下，利用藍色深淺與蛋白質濃度的線性關系作標準曲線并測定樣品中蛋白質的濃度。
對雙縮脲反應產生干擾的離子，同樣容易干擾Lowry反應。而且對后者的影響要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等對Lowry反應均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質濃度高時，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉—*溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色后會色淺，則必須提高碳酸鈉—*溶液的濃度1~2倍。
此外進行測定時，加Folin—酚試劑時要特別小心，因為該試劑僅在酸性pH條件下穩(wěn)定，但上述還原反應只在pH=10的情況下發(fā)生，故當Folin一酚試劑加到堿性的銅—蛋白質溶液中時，必須立即混勻，以便在磷鉬酸—磷鎢酸試劑被破壞之前，還原反應即能發(fā)生。
